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行业动态

基因编辑:CRISPR试验提升及sgRNA设计方案

  • 作者:admin
  • 发布时间:2021-07-28 16:31
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    一、CRISPR技术运用
    利用CRISPR基因编辑技术,可精准搭建CAR-T细胞。基本搭建CAR-T细胞的方式,是利用逆转录病毒或是慢病毒,将CAR基因任意插入到T细胞基因中。但这类任意插入会因为可变性造成潜在性的基因遗传不良反应。现阶段,利用CRISPRHDR的方式,可将CAR非特异插入到T细胞的总体目标遗传基因,如PD-1、TRAC等结构域,那样既能够减少由PD-1基因表达导致的自身免疫病效用,还可以根据新插入的CAR具体指导T细胞鉴别表述了恶性肿瘤抗原体的癌细胞,进而使CAR-T医治更安全性、合理。
    CRISPR/Cas-9基因编辑技术运用于抗体靶向药物治疗。现阶段,FDA获准的抗体类药有多种多样,如抗VEGF抗体、抗CD20抗体、抗CD20抗体等,CRISPR/Cas9技术可评定恶性肿瘤细胞表层潜在性非特异靶标,在抗体的靶向药物治疗中充分发挥关键功效。据报道,利用CRISPR/Cas-9基因编辑技术在RNF43基因突变的肝胀软管恶性肿瘤细胞中开展全基因筛选,发觉Frizzled-5蛋白激酶在胰腺肿瘤细胞的生长发育中起主导作用,Frizzled-5抗体可以显著抑止荷瘤小白鼠细胞的升值,变成免疫疗法药物研究的新方位。
    二、CRISPR技术发展趋势
    现阶段,运用较为完善的CRISPR基因编辑技术关键有Baseeditors、Primeeditors及其Cas转座及资产重组酶系。
    Baseeditors可在基因靶位点完成C:G>T:A或A:T>G:C的碱基更换,但并不可以完成C:G>A:T和A:T>C:G和C:G>G:C和A:T>T:A的碱基更换,与此同时也没法进行基因片段的插入和删掉。在绿色植物繁育和基因功能科学研究中开展随意碱基更换、删掉或插入必须新的方位和构思。
    CRISPR的第三种新起技术即Cas转座及资产重组酶受体的基因编辑系统软件,它是将转座酶或资产重组酶与dCas-9蛋白质结合进行基因DNA的定项转座和资产重组。学者将Cas蛋白质与资产重组酶结合,可完成人源细胞中总体目标DNA片段的删掉。
    三、sgRNA特性
    sgRNA,即SingleguideRNA,是人造的多肽链guideRNA;sgRNA编码序列约长100nt,在其中cr-RNA编码序列约20nt,tracr-RNA编码序列约80nt,正中间由Linkerloop联接,产生多肽链guideRNA构造。
    人造sg-RNA的优点有:编写高效率、纯净度高、历经有机化学改进、非常容易被细胞接纳、实验过程简易、减少了非靶不良反应;还能够给予化学修饰提升sgRNA可靠性。与此同时,给予RUO、HPLC、GMP等级的sg-RNA生成。
    伴随着生物学家对CRISPR基因编辑技术的深入分析,CRISPR基因编辑技术运用于愈来愈的研究领域,CRISPR试验也在愈来愈多的试验室风靡起來。此次专题讲座,大家将详解CRISPR技术发展趋势、CRISPR试验步骤及FAQ、sg-RNA特性及设计方案软件应用、CRISPR提升及GMPsgRNA生成。
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