欢迎来到广州博徕斯生物科技股份有限公司

博徕斯生物,高技术,高质量,高性价比

国内最全的基因编辑(cas系列)蛋白种类提供商

咨询热线:

189-2400-9712

广州博徕斯生物科技股份有限公司

新闻资讯

联系我们

手机:189-2400-9712

邮箱:service@bio-lifesci.com

地址:广州高新技术产业开发区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器A802房

行业动态

Cas13a剖析完成通用性且无核苷酸扩增的单分子RNA确诊

  • 作者:admin
  • 发布时间:2021-01-18 15:35
  • 点击:
    
    近日,华南师范学校精英团队在ACSNano发布了一篇名为《AnUltralocalizedCas13aAssayEnablesUniversalandNucleicAcidAmplification-FreeSingle-MoleculeRNADiagnostics》的文章内容。该精英团队将RNA开启的Cas13a催化反应系统限定在细胞大小的管式反应器中,根据液滴微液体另外提升靶标和汇报探头的部分浓度值,完成了无核苷酸扩增(NAA)、无反转录(RT)和RNA定性分析的方法。
    01Introduction
    因为RNA分子在诸多微生物全过程中的关键功效,RNA分子做为检验靶标在从生物医学工程科学研究到疾病诊断的各行各业都是有非常大的运用使用价值。但目前的RNA确诊方法,如逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),关键取决于核苷酸扩增(NAA)和反转录(RT)全过程,这会产生扩增误差、交叉式环境污染和试品遗失等难题。为了更好地处理这种难题,该科学研究精英团队开发设计了一种受到限制效用启迪的Cas13a检验方法,用以单分子RNA确诊,清除了对NAA和RT的必须。
    基本思路
    单独分子在1μL容积中的部分浓度值为aM级分子浓度值,而这超过了传统式生物化学剖析或探测器的检验極限,但假如把单独分子限定在1nL或1pL的容积内,其部分浓度值将能够各自提升到1.66fm或1.66pm。把分子做为数据信号汇报,造成的高部分浓度值则能被一般探测器检验到。
    将靶标RNA、Cas13混合物与油一起乳状液成数千个皮升尺寸的液滴管式反应器。单独靶标RNA被crRNA鉴别后,会造成含有莹光官能团和猝灭官能团的RNA汇报分子裂化,进而造成莹光呈阳性液滴。根据将微流控液滴集成ic与光学显微镜紧密结合,能够平稳地造成高宽比匀称的微滴,并自组装成单面液滴列阵,用以根据莹光显像的液滴记数。根据将每一个正负极液滴各自特定为“1”和“0”来完成对单独RNA分子的数据记数。那样,就可以完成无NAA、无RT和RNA定量分析。
    02Results
    最先,该团队在仿真模拟体细胞的限定效用的服务平台下要该方法对单分子microRNA开展定量分析范畴剖析后,结果显示,对于同样化合物,基本Cas13a剖析只有得到500fM的检验低限,而超局域网Cas13a剖析的敏感度可提升10000倍之上,检验低限做到10aM。
    接着,该团队应用超局域网Cas13a分析方法立即剖析生成编码序列和癌病病人血清蛋白样版中的miRNA。数据显示,该方法对同宗编码序列、乃至单多肽链差别编码序列的辨别具备非常好的非特异,也可以取得成功地从临床医学血清蛋白样版里将乳癌病人与正常人差别起来,该結果也获得了qRT-PCR方法的进一步确认。
    用该方法检验病菌16SrRNA(≈1500nt)和临床医学标本采集中的SARS-CoV-2病毒基因(≈30000nt),結果也获得了qRT-PCR的进一步确认,展现了该方法的普遍意义。
    03Conclusion
    该方法的四个优势:
    1.不用核苷酸扩增(NAA)
    2.能够完成4个量级的采样率,包含了miRNA表述的当然采样率
    3.具备普遍意义,能够从生成编码序列到临床医学样版中精准记数microRNAs、16SrRNAs和SARS-CoV-2RNA
    4.出示了肯定的数据量化分析,并降低了内部参考或校正的应用。
在线客服
联系方式

热线电话

189-2400-9712

上班时间

周一到周五

公司电话

线