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行业动态

CRISPR/Cas 基因编辑胰蛋白酶的那些事

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-12-02 15:52
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CRISPR/Cas系统的发觉引起了技术革命的浪潮并造成了巨大的社会影响。该系统软件是细菌进化出的一套专业对于噬菌体和外源遗传信息的防护系统,用于抵挡和消除侵入的异己遗传信息。CRISPR(周期性间距的短回文序列反复簇)/Cas(CRISPR 有关蛋白质)是病菌和古细菌获得性免疫所必不可少的。
  01. 身体 CRISPR/Cas 全过程:病菌获得性免疫
  获得性免疫前期,外源性 DNA 被融合到病菌基因组中的 CRISPR 结构域。CRISPR 结构域在 crRNA 微生物生成全过程中基因表达成 crRNA。在影响期内,Cas 核苷酸内切酶与 crRNA 融合,切割带有与 PAM 编码序列邻近的 crRNA 相辅相成编码序列的外源性 DNA。收看正下方视頻,掌握病菌获得性免疫的身体 CRISPR/Cas 全过程。
  02. NEB 的 Cas 核酸酶
  Cas9 核酸酶是一种发夹结构 DNA 核酸酶,是 CRISPR 免疫反应中的重要成分。
  Cas9 核酸酶可做为一种强有力的基因组编辑工具,在其中一个最重要的优点是 Cas9 蛋白质基本上能够在不一样的 gRNA 正确引导下靶向治疗随意的基因组结构域。科学研究工作人员可灵便的、非特异的根据体外实验在 ~20 bp 鉴别编码序列的部位断开 DNA 发夹结构。在体细胞和临床实验中,基因编辑的关键正本— Cas9 核酸酶和指导 RNA(一般为 single-guided RNA,sgRNA)可根据下列三种方式得到 :DNA 质粒/病原体编号有 Cas9 核酸酶和 sgRNA;RNA 编号有 Cas9 核酸酶和 sgRNA;立即应用 sgRNA 与 Cas9 核酸酶的一氧化氮合酶。
  CRISPR/Cas 系统(核酸酶和指导 RNA)的简易性,使该系统软件具备优良的试验室运用使用价值。基因组断裂处根据非常容易出現失衡的非同源尾端联接 (NHEJ) 或同源定项资产重组 (HDR) 二种方法来激话修复。在出示有与总体目标基因座同源的肾源模版的状况下,HDR 方式被激话,完成精确突然变化。在沒有模版的状况下,NHEJ 被激话,造成 插进或缺少(indels),进而更新改造总体目标地区,即开展基因编辑。
   与大家熟识的 Cas9 酶相近,Cas12a可用以编写总体目标 DNA。该蛋白质最开始被称作 Cpf1,由张锋精英团队在其 2015 年的 cell 毕业论文中初次明确提出。Cas12a(Cpf1) 是基因编辑酶大家族的关键一员,它可以在 Cas9 不可以功效的部位切割 DNA;另外,因为 Cas12a(Cpf1)切割 DNA 后造成黏性末端(即不规律的边沿),这促使在切割处插进新遗传基因更加非常容易。EnGen® Lba Cas12a(Cpf1)核酸酶鉴别饱含 T 的 TTTN PAM(protospacer adjacent motif)编码序列,为基因打靶开拓了新的基因组地区。所需 gRNA 短,仅 41-44 个碱基。其有两个核精准定位数据信号,提升 运送到细胞质的高效率。其切割物质含有 5’ 突显尾端。该酶的活性溫度区段为 16℃- 48℃。与碳水化合物革兰阴性杆菌(Acidaminococcus)的同源酶对比,在更低溫度下特异性仍然优良,能用以编写冷血动物基因组,如斑马鱼和非洲爪蟾等。浓度较高的酶可用以显微镜注入、电转和脂质体转染。
 
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