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行业动态

CRISPR-Cas12a数据可视化迅速核酸检测

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-11-26 10:47
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  背景
  基因编辑技术“达人“张锋博士研究生佳選的精英团队,最大的奉献之一是研究发现CRISPR_Cas9能够在gRNA正确引导下非特异切割DNA,完成基因编辑技术作用。
  殊不知最近,张锋精英团队又发觉CRISRP系统软件除开能够开展高效率地基因编辑技术(主要是Cas9酶)以外,还能够开展基因检查(Cas13,Cas12a,Csm6),类似文章早已发布在Nature和Science。先介绍一下浙江大学精英团队和清华精英团队一起联合开发的Cas12a基因检测系统。
  Cas酶详细介绍
  CRISPR_Cas核酸酶关键包含两大类:一类是RNA正确引导下能够切割RNA链的Cas13a和Cas13b;另一类是RNA正确引导下能够切割DNA链的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都是有一个相互特性,除开切割靶向治疗DNA或RNA编码序列以外,还能够切割别的DNA或RNA编码序列,可是Cas13酶的这类额外切割工作能力比Cas12a要好。Cas12a的靶遗传基因是ssDNA和dsDNA,而且Cas12a正确引导链必须鉴别PAM编码序列(Cas12a的PAM编码序列为TTTV)。
  Cas12a详细介绍
  Cas12a酶的额外DNA酶切作用,能够切割特殊单链DNA探针(荧光和淬灭标识),完成dna检测。RPA扩增的双链DNA,在crRNA的正确引导下Cas12a能够切割发夹结构模版DNA和荧光标识探针,探针被水解反应后释放出来荧光数据信号,根据检验荧光数据信号便可了解是不是有DNA模版。
  CRISPR-Cas12a迅速核酸检测
  浙江大学和清华精英团队将RAP扩增技术性和Cas12a的这类说白了的“脱靶功效”,开展融合完成了遗传基因快速检测。最先开展RPA迅速等温过程扩增,扩增全过程只必须15min,而且在扩增反映管内,除开包含RPA扩增的全部管理体系以外,也包含除Cas12a酶以外酶切的全部管理体系,她们是将Cas12a酶固定不动在扩增反映壁厚上。RPA扩增15min后,根据离心作用,Cas12a酶与反映液混和,再反映15min。因RPA扩增物质量较多,反映完毕后可在高清蓝光(440-485nm)下人眼观查到荧光。学者将这类检验方式称之为Cas12aVDt(Cas12a-based Visual Detection),也就是Cas12a依靠的数据可视化检验。
  全部检验全过程中RPA扩增的反映管理体系和Cas12a酶切的管理体系是混和在一起的,为了更好地能让Cas12a合理地切割RPA扩增物质,创作者根据很多试验探索发觉用NEB buffer 2.1有不错的酶切实际效果。而为啥RPA扩增全过程中沒有将Cas12a一起增加反映管理体系,关键也是由于Cas12a能够切割双链DNA。假如在RPA扩增全过程中增加Cas12a,将不容易有很多的物质造成,也不会很多的荧光数据信号。
  结论
  Cas12aVDet系统软件全部现场采样只必须30min,完成了快速检测。根据高清蓝光检验人眼观查是不是有PCR数据信号,完成了及时检验。检验退出能够做到10aM,完成了高灵敏检验。因此 Cas12aVDet是一种迅速,灵巧和简易的DNA无损检测技术。
 
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