欢迎来到广州博徕斯生物科技股份有限公司

博徕斯生物,高技术,高质量,高性价比

国内最全的基因编辑(cas系列)蛋白种类提供商

咨询热线:

189-2400-9712

广州博徕斯生物科技股份有限公司

主页 > 新闻资讯 > 行业动态 >

联系我们

手机:189-2400-9712

邮箱:service@bio-lifesci.com

地址:广州高新技术产业开发区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器A802房

行业动态

Cas12 简单化组合筛选

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-09-25 15:23
  • 点击:
肿瘤转移等很多分子生物学全过程涉及到繁杂的基因遗传相互影响,不可以彻底用单独基因敲除的方式来处理。尽管 Cas9 是单独基因敲除筛选运用的金标准,但其多种敲除工作能力不足理想化,它在组合筛选中的运用也因而遭受了限定。好几个单独精英团队近期提升了 V 型 CRISPR 系统软件 Cas12a(Cpf1),为规模性组合基因编辑技术出示了好于 Cas9 的代替品 (DeWeirdt et al., 2020; Gier et al., 2020)。
为何 Cas12a 比 Cas9 更合适用以组合筛选?Cas12a 不用 RNase III 和反式激话 RNA (tracrRNA) 就能解决 CRISPR RNA (crRNA) 列阵,而 Cas9 要进行同样每日任务则务必应用这二种原材料。因为 Cas9 自身没法解决 crRNA 列阵,因而 Cas9 引导序列一般务必在独立的表述部件中表述,每一个部件表述一个引导序列。多种 Cas9 引导序列中的反复元器件会造成他们非常容易在慢病毒传送、PCR 及深层转录组测序的全过程中资产重组调解偶联反应。这种要素会使百度文库设计方案、复制和剖析越来越更为繁杂。依靠 Cas12a,科学研究工作人员能够 生成包括好几个 crRNA 的寡核苷酸,并轻轻松松将其复制到慢病毒载体中,用以组合筛选。除此之外,多种 Cas12a 引导序列媒介中的反复元器件相对性较短,而且对序列装饰的耐受力高些。这让多种 Cas12a 引导序列在全部筛选全过程中不容易资产重组调解偶联反应 (DeWeirdt et al., 2020; Gier et al., 2020)。Twist Bioscience 生产制造的 300mer 寡核苷酸可另外编号 3-4 个引导序列。
尽管 Cas12a 是一种非常好的多种激光切割酶,但它也是有一些局限。与 Cas9 对比,它具备更严苛的前间区序列相邻基序 (PAM) 非特异 (5’-TTTV),而且突然变化法律效力也更低。大家根据对来源于碳水化合物革兰阴性杆菌的 Cas12a 开展构造引导的蛋白质工程项目改善了这种主要参数 (AsCas12a; Kleinstiver et al., 2019),得到了一种名叫加强型 AsCas12a (enAsCas12a) 的装饰酶,该装饰酶在对 PAM 鉴别很重要的残基中包括了好几个点突变。除开拓展其 PAM 非特异(如今包含 TTYN、VTTV 和 TRTV 等)以外,大家还发觉 enAsCas12a 的均值编写法律效力比 AsCas12a 提升了一倍。根据提升好几个核精准定位序列,确立 crRNA 中靶和脱靶标准,AsCas12a 的法律效力获得了进一步的提升 (DeWeirdt et al., 2020; Gier et al., 2020)。
 
在线客服
联系方式

热线电话

189-2400-9712

上班时间

周一到周五

公司电话

线