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行业动态

taq酶表述的一些经验

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-08-06 10:48
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资产重组TaqDNA聚合酶遗传基因及表达载体插进资产重组Taq DNA聚合酶遗传基因的pET-28a表述质粒,该质粒是由英国Novagen企业发布的能在大肠埃希菌中高效率表述的一种质粒媒介。该质粒在克隆位点前有一个T7启动子,在T7启动子前有一个6×His-Tag coding编码序列,是T7的增强子,多克隆位点上面有NcoI—Xhol11个酶切位点,媒介上也有一个卡那霉素(Kan)的挑选标识。资产重组的Taq DNA聚合酶遗传基因根据NdeI和Xhol双酶切复制在表述质粒pET-28a多克隆位点上。
宿主菌为BL21(DE3)。菌种,即宿主菌BL21经噬菌体DE3溶源化后,DE3的lacUV5强启动子及坐落于其中下游的T7RNA聚合酶遗传基因被融合到宿主菌的基因DNA中。宿主菌在非呼酸乳清蛋白类似物IPTG的诱发功效下会造成很多的T7RNA聚合酶,而T7RNA聚合酶能非特异地鉴别Pet-28a表达载体中的T7启动子编码序列,进而高效率地表述目地重组蛋白。因为IPTG不容易被宿主菌运用,因而向细胞培养液中添加小量的IPTG 就能lacUV5强启动子造成长久的诱发功效。
 
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