二种独特的引物和缓冲溶液.引物I3'尾端与靶编码序列相辅相成，5'端含T7RNA多聚酶的启动子，这一引物是用以合成cDNA的.引物Ⅱ的碱基序列与cDNA的5'未端相辅相成.

在NASBA反映时，最先引物Ⅰ与RNA模板复性(融合)，AMV逆转录酶催化反应合成cDNA，RNaseH水解反应cDNA上的RNA，产生一条多肽链的DNA;引物Ⅱ随后与此cDNA的5'未端融合，逆转录酶在这里DNA模板的具体指导下合成第二条DNA链.那样产生的DNA发夹结构带有T7RNA多聚酶的启动子.该酶即为此DNA为模板，基因表达出与试品RNA编码序列同样的RNA链，并且每条DNA模板在该水解作用下可合成约一百个复制的RNA.每条新的RNA又可做为逆录酶的模板合成cDNA.这般不断开展，将得到 大量的RNA和cDNA.