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行业动态

独立序列复制系统

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-08-04 11:47
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独立序列复制系统(self-sustainedsequence replication,3SR),又被称为依靠核苷酸序列的增加(Nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)或再生长发育序列复制技术.1991年Guatelli等最先报导了这一技术性.NASBA关键用以RNA的增加、检验及转录组测序.该反映依赖于AMV逆转录酶,T7RNA多聚酶和核酸酶H(RNaseH)相互合作而进行.
3SR反映管理体系中除带有所述三种酶外,还带有dNTP,NTP(核糖核苷),二种独特的引物和缓冲溶液.引物I3'尾端与靶序列相辅相成,5'端含T7RNA多聚酶的启动子,这一引物是用以生成cDNA的.引物Ⅱ的碱基序列与cDNA的5'未端相辅相成.
在3SR反映时,最先引物Ⅰ与RNA模板复性(融合),AMV逆转录酶催化反应生成cDNA,RNaseH水解反应cDNA上的RNA,产生一条多肽链的DNA;引物Ⅱ随后与此cDNA的5'未端融合,逆转录酶在这里DNA模板的具体指导下生成第二条DNA链.那样产生的DNA发夹结构带有T7RNA多聚酶的启动子.该酶即为此DNA为模板,基因表达出与试品RNA序列同样的RNA链,并且每条DNA模板在该水解作用下可生成约一百个复制的RNA.每条新的RNA又可做为逆录酶的模板生成cDNA.这般不断开展,将得到 大量的RNA和cDNA.
 
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