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行业动态

T7噬菌体RNA聚合酶和T7起动分系统在哺乳类动物体细胞表达蛋白

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-08-03 21:50
  • 点击:
(1)依据哺乳类动物体细胞钟爱密码子优化初始t7rna聚合酶基因序列,在上述基因序列上、中下游各自添加酶切位点,并在中下游加上核精准定位编码序列;基因合成的t7rna聚合酶基因序列
 
(2)将上述生成的t7rna聚合酶基因克隆到质粒puc57中,根据酶切位点联接到pcdna3.1真核表达媒介上,搭建获得pcdna3.1-rnap质粒;
 
(3)将待表达遗传基因联接到puc57媒介上,搭建获得待表达遗传基因的质粒;上述puc57媒介具备t7启动子、多克隆位点、ires编码序列及其t7终止子;
 
(4)将流程(2)和(3)中获得的质粒做为双质粒共表达系统软件,以共转染真核细胞,及其表达蛋白质。
 
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