噬菌体t7rna聚合酶构造简易,是相对分子质量仅为100 kD的单亚基酶,并且是现阶段己知的基因表达特异性最大RNA聚合酶。此外,T7噬菌体启动子归属于构成型的强启动子,具备严苛的启动子非特异,不容易与靶细胞的基因转录互相影响。因此,根据t7rna聚合酶以及启动子的偶联反应表达系统软件,不仅在身体之外RNA生成及大肠埃希菌外源性蛋白质生成中获得了广泛运用,还一样的被运用于真核细胞,提升目的基因的表达水准。可是,t7rna聚合酶本身的表达通常依靠资产重组痘苗病毒载体,造成 物质中带有沒有除去的痘苗病毒感染。在本课题研究中,运用基础的生物学元器件,如CMV启动子、T7启动子、和內部核糖体进入位点(IRES)等,大家拼装了一个t7rna聚合酶的正反馈表达系统软件。为认证这一正反馈系统软件,大家搭建了由T7启动子管控的报告基因,翠绿色荧光蛋白和荧光素酶的表达质粒。根据即时定量PCR方式、共聚焦光学显微镜、体细胞流式的技术性和双荧光素酶魅力检验,大家将认证t7rna聚合酶正反馈回路在真核细胞的表达。