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行业动态

CRISPR-Cas12a蛋白复合体切割双链DNA的动态性管控体制

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-07-09 15:28
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Cas12a蛋白(别称Cpf1)在哺乳类动物的基因编辑技术中展示出了比Cas9蛋白高些的切割非特异。因而Cas12a切割双链DNA的分子结构体制遭受了学者的普遍关心。该科学研究运用单分子结构莹光共震能量转移技术性,根据标识在crRNA和DNA上的莹光FRET对,来立即观察LbCas12a复合体在切割双链DNA全过程中的动态性构象变化,最后搭建的定量分析动力学方程如图所示。最先,Cas12a/crRNA二元复合物鉴别靶点DNA序列,产生三元复合物,并在PAM编码序列近端刚开始产生R-loop(low FRET态)。伴随着R-loop的进一步拓宽,Cas12a蛋白的核酸酶特异性被激话,而且促使非相辅相成链(NTS)从双链DNA结构解除,将切割结构域曝露出去,以进行NTS链的切割(medium FRET态)。破裂的NTS链平稳了Cas12a复合体的相辅相成链(TS)切割构象(high FRET态),以进行对TS链的切割。
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