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行业动态

原核表达蛋白的纯化方式

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-07-04 15:47
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较为普遍的原核表达与蛋白纯化的方式 有运用聚组氨酸标签和GST标签对重组蛋白开展纯化,这就必须在搭建原核表达载体时在蛋白在氮端或碳端再加标签。如今一般用以原核表述的媒介都是有这种标签编码序列,挑选适合的酶切位点就可以搭建含有纯化标签的重组蛋白。一般来说仅几个到几十个碳水化合物尺寸的标签编码序列对蛋白是沒有危害的,也可在纯化后挑选适合的蛋白酶把标签编码序列切去。
 
下边以聚组氨酸标签为例子说说如何纯化带有标签编码序列的重组蛋白。聚组氨酸标签一般由六个组氨酸组成,其纯化基本原理是组氨酸可以与镍正离子紧密联系,进而挂上去柱头上,其他蛋白由于只带有小量组氨酸,因此与镍正离子的结合性较小,会立即流出去,略微用平衡液清理一下后,留到柱头里的基本上仅有带有六个组氨酸标签的重组蛋白。再用浓度较高的的咪唑开展过柱,浓度较高的的咪唑会替代聚组氨酸标签与纯化柱中的镍正离子融合,使重组蛋白被过柱出来。原核表达与蛋白纯化全过程中应用的实验试剂全是由缓冲溶液和咪唑构成,如果是纯化包涵体蛋白,实验试剂上都必须提升浓度较高的的尿素溶液来融解包涵体蛋白。
 
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