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行业动态

基于可逆dCas9结合的多功能转录控制

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-04-22 12:09
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基于可逆dCas9结合的多功能转录控制

dcas9

在体外以时间依赖性方式控制转录的能力在分子生物学和纳米技术中有许多应用。在这里,我们展示了一种方法,通过催化死亡的化脓性链球菌CRISPR-Cas9酶(dCas9)使用单指导RNAsgRNA)定向转录阻断,能够在体外精确,独立地控制多种RNA转录物的产生。我们显示当与DNA模板结合时,dCas9sgRNA复合物通过来自噬菌体SP6T3T7RNA聚合酶(RNAP)(> 99.5%效率)形成强烈的转录阻断,并且通过E部分阻断转录

大肠杆菌RNAP(效率约70%)。我们发现所有三种噬菌体RNAPs在遇到dCas9阻断时都从DNA模板解离,而大肠杆菌 RNAP在我们实验的至少90分钟持续时间内保持结合。当将四个错配引入sgRNA靶序列的5'末端时,阻断保持> 95%的效率。值得注意的是,当使用这种不匹配的阻断时,通过添加与sgRNA完全匹配的双链竞争物DNA,可以根据需要激活特定RNA种类的产生。该策略能够以相同的DNA模板以时间控制的方式产生多种RNA种类,证明了转录控制的新方法。

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