dCas9的修饰的CRISPR工具

 

CRISPR激活（CRISPRa）是一种使用dCas9的修饰的CRISPR工具，没有内切核酸酶活性的Cas9突变，在dCas9或指导RNA （gRNA）上添加了转录激活因子。

与标准CRISPR-Cas9系统一样，dCas9激活系统依赖于类似的组分，例如用于调节或修饰基因的Cas9变体，用于将Cas9引导至预期靶标的gRNA，以及用于引入细胞的载体。然而，虽然标准的CRISPR-Cas9系统依赖于通过Cas9的内切核酸酶活性产生DNA断裂，然后操纵DNA修复机制进行基因编辑 ，dCas9激活系统被修饰并使用转录激活因子来增加目的基因的表达。此类系统可用于许多目的，包括但不限于遗传筛选和目的蛋白质的过表达。

Dcas9的应用：

dCas9激活系统允许表达相同细胞中的所需基因或多个基因。可以使用涉及激活基因表达的全基因组筛选来研究涉及某一过程的基因。

检查哪些sgRNA产生表型表明哪些基因参与特定途径。dCas9激活系统可用于精确控制哪些细胞被激活以及激活何时发生。已经制备了dCas9构建体，其在光或化学物质存在下开启dCas9-活化剂融合蛋白​​。通过增加对细胞类型的形成或维持很重要的某些基因的表达，也可以将细胞重编程或从一种细胞类型分化成另一种细胞类型。