dCas9作为转录调节的工具

 

全世界的科学家都对CRISPR作为基因编辑器的非凡简洁性和多功能性感到惊叹 - 但“杀死”它的催化活性可能是一个更加精彩的想法！

2013年，齐等人。来自化脓性链球菌的突变Cas9的核酸酶结构域（在HNH结构域中产生H840A突变和在RuvC结构域中产生D10A突变）以产生核酸酶缺陷的“dCas9”（也称为dCas9无效突变体）。尽管Cas9的这种“迟钝”和“死亡”版本不再能够切割DNA，但在sgRNA的指导下，它仍能以相同的精度靶向和结合DNA。但是，不是不可逆地改变基因组，dCas9的结合干扰靶位点的转录 - 导致基因的可逆沉默。

使用dCas9本身作为转录干扰的方法只是一个开始。不久之后，研究人员还开始附加效应物（如阻遏蛋白和激活因子结构域），以利用dCas9的可逆基因激活，表观基因组编辑等目标定位能力。无论是启动子区域，调控区域还是编码区域，科学家们都可以使用CRISPR dCas9系统作为模块化支架，轻松实现附着，实现对任何基因的控制，而不会引入不可逆的DNA损伤突变。