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行业动态

修改CRISPR Cas9系统用于转录抑制

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-04-17 11:31
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修改CRISPR Cas9系统用于转录抑制
dcas9

单独的dCas9能够靶向抑制基因转录,因为其与靶位点的结合在空间上干扰转录机制的结合和功能,称为CRISPRi(或CRISPR干扰)的方法。这种简单的CRISPRi系统可以实现高达1,000倍的抑制,有效地敲除细胞中的基因表达。尽管该系统在细菌,酵母和其他原核细胞中表现相当好,但它在抑制哺乳动物细胞中的基因表达方面效果较差。

这一挑战导致了dCas9-KRAB系统的发展 - 其中dCas9KRABKrüppel相关盒)融合,KAB1Kox1的转录抑制子结构域。这种增强的CRISPRi系统依赖于KRAB招募多种组蛋白修饰物的能力,这些组蛋白修饰物通过形成异染色质可逆地抑制基因表达。使用该系统,在瞬时转染过程中实现了高度特异性内源真核基因表达降低60-80此外,在HeLa细胞中稳定整合的dCas9-KRAB引起内源基因和启动子区域的强烈5-10倍抑制,当靶位点位于转录起始位点下游50-100bp时观察到100倍效应。dCas9-KRAB也对细胞生长没有影响,使其成为基因不表达的无毒方法。

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