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行业动态

用dCas9系统操纵组蛋白

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-04-17 11:28
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dCas9系统操纵组蛋白
dcas9

dCas9-p300-通过修饰的CRISPR Cas9系统进行表观遗传激活

为了更清楚地了解基因调控背后的机制,需要能够以高特异性调节表观遗传标签的工具。创建了与锌指蛋白或转录激活因子样效应物(TALEs)融合的组蛋白脱乙酰酶或DNA甲基转移酶等技术,通过靶向去甲基化和脱乙酰化来修饰表观基因组。然而,组蛋白乙酰化是最强大的基因表达增强子系统之一。希尔顿等人。开发了dCas9-p300系统以满足这一需求,能够直接修改涉及广泛细胞途径和过程的染色质状态。

在该系统中,dCas9与人E1A相关蛋白p300的催化核心融合,后者是乙酰化组蛋白的结构域的关键组分。当靶向编码区或调控区时,该结果系统成功诱导基因表达,证明其作为下游基因的反式激活因子的有效性。具体地,观察到活化为50(对于OCT4MyoD的启动子),以10,000倍(对于IL1RN启动子时靶向启动子或增强。通过转录组分析评估,基因激活是高度特异性的,表明单个染色质变化足以激活(或沉默)。因为该系统使用哺乳动物p300,它还具有最小的免疫原性潜力,使其有利于体内应用。

dCas9-p300是一种简单而独特的工具,用于在功能基因组学研究中绘制表观基因组,调控元件和靶基因表达之间的复杂关系。通过将dCas9-p300与诱导型对照相结合,研究人员将能够实时激活基因,从而在全基因组筛选中实现监管元素活动。

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