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CRISPR剪除基因的实际基本原理是什么?

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-04-16 00:19
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CRISPR剪除基因的实际基本原理是什么?
cas9

毫无疑问,这两年大火的CRISPRCas9基因敲除技术是受细菌免疫系统启迪而成、并运用到哺乳类动物细胞上的这项突破。这项技术主要由sgRNA精准定位到1个基因位点上,由Cas9酶在该位点进行DNA双链的切割,切割造成DNA修补通道的激话,促使其他的碱基添加进切割的位点,导致frameshift突变,促使基因没法被表述成功能性蛋白。

CRISPR除基因的实际基本原理是什么?

Cas9由的RECI/II, HNH, RuvC, Bridge Helix, Pam Interacting这些domain构成

一、sgRNACas9紧密结合。Cas9产生了样子上的转变,产生激活状态。

PAMtarget DNA上的一小段序列,不一样的Cas9鉴别不一样PAM

Streptococcus pyogenesis中的Cas9而言,它鉴别的PAM5-NGG-3′因而在设计方案sgRNA的时候,必须先寻找GG,随后取其边上的序列。绝大多数基因序列常有GG。但如果没有GG,就用其他细菌提出来的Cas9来做。

二、Cas9会在PAM上游第三个碱基后断开双链,由Cas9HNHRuvC一部分来进行裁切。

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