CRISPR剪除基因的实际基本原理是什么？

毫无疑问，这两年大火的CRISPR（Cas9）基因敲除技术是受细菌免疫系统启迪而成、并运用到哺乳类动物细胞上的这项突破。这项技术主要由sgRNA精准定位到1个基因位点上，由Cas9酶在该位点进行DNA双链的切割，切割造成DNA修补通道的激话，促使其他的碱基添加进切割的位点，导致frameshift突变，促使基因没法被表述成功能性蛋白。

CRISPR剪除基因的实际基本原理是什么？

Cas9由的RECI/II, HNH, RuvC, Bridge Helix, Pam Interacting这些domain构成：

一、sgRNA和Cas9紧密结合。Cas9产生了样子上的转变，产生激活状态。

PAM是target DNA上的一小段序列，不一样的Cas9鉴别不一样PAM。

拿Streptococcus pyogenesis中的Cas9而言，它鉴别的PAM是5′-NGG-3′因而在设计方案sgRNA的时候，必须先寻找GG，随后取其边上的序列。绝大多数基因序列常有GG。但如果没有GG，就用其他细菌提出来的Cas9来做。

二、Cas9会在PAM上游第三个碱基后断开双链，由Cas9的HNH和RuvC一部分来进行裁切。