双链断裂（DSB）之后，会有两种修补方法产生的可能

 

Non-Homologous End Joining (NHEJ)

Homology Directed Repair (HDR)

Cas9导致基因不被表述是由NHEJ修补通道引起的，NHEJ修补通道。

HDR vs. NHEJ

一、Ku70/Ku80鉴别DSB

二、DNA-PKcs 和XRCC4-ligase IV会被招募回来，一起还要来PAXX, XLF，产生1个complex, 这一complex会把DSB修补好。

这一过程会引起1-10个碱基的插进，由2/3的概率会引起frameshift 突变，造成基因没法被表述，也就是人们说的基因剪除。

殊不知，Cas9导致的DSB不一定会引起NHEJ，由于DSB end的碱基并没有毁坏，这类end也叫blunt end，非常容易再度黏连一起。那麼突变是如何引起的？

实际上，就算blunt end再度黏连一起，sgRNA会再度鉴别这些序列，随后Cas9会再度切，不断下来，直至产生了由NHEJ引导出的突变，sgRNA才不会鉴别这些序列。