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行业动态

dCas9的背景

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-04-16 00:14
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dCas9的背景
dcas9
  CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)和CRISPR相关(Cas)基因的功能在选择细菌和古细菌的适应性免疫中是必不可少的。CRISPR使用Cas9蛋白识别DNA序列,其靶标特异性仅由小指南(sg)RNA和原型间隔区相邻基序(PAM)决定。在与靶DNA结合后,Cas9-sgRNA复合物产生DNA双链断裂。基于这种RNA指导的核酸酶活性,CRISPR已被证明是编辑多种生物的基因组的有力工具。此外,重新利用的核酸酶失活的Cas9(dCas9)蛋白已被用于调节内源基因表达和活体和固定细胞中基因组基因座的标记。
dCas9应用:
重组dCas9(D10A和H840A)蛋白适用于活细胞和固定细胞中基因组oci的成像以及基因表达调节。
dCas9序列:
突变的CRISPR相关核酸内切酶Cas9(氨基酸1至1368)与D10A和H840A(Uniprot:Q99ZW2用于Cas9)。为了促进核进入,将两个核定位信号序列(NLS)与dCas9蛋白的N-和C-末端融合。
dCas9储存和稳定性:
如果在1-2周内使用,则应该储存在4°C的环境下储存,在-20°C冷冻更长时间。对于长期储存,建议添加载体蛋白(0.1%HSA或BSA)。并且应该避免多次冻融循环,这样会有害于dcas9的质量。
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