CRISPR-Cas12a核酸酶结合没有核糖核酸/脱氧核糖核酸互补性的柔性脱氧核糖核酸双链体

 

Cas12a(也称为“Cpf1”)是一种2类V-A CRISPR相关核酸酶，可在特定位点切割双链脱氧核糖核酸。这Cas12a效应酶包含单一蛋白质和CRISPR编码的小核糖核酸(Cr核糖核酸)，并已用于基因组编辑和操作。这里报道的工作检查了Cas12a效应酶和双链之间碱基配对状态不同的脱氧核糖核酸双链体。

数据显示，在核酸导向和核酸靶链之间缺乏互补性的情况下，Cas12a将双链体与不成对的片段绑定。这些非目标双链体在Cas12a负责核糖核酸引导的双链脱氧核糖核酸结合的位点，但由于缺乏核糖核酸/脱氧核糖核酸杂交形成而未被切割。这种混杂结合归因于邻近原间隔基基序的不成对片段诱导的增加的脱氧核糖核酸灵活性。结果表明，目标识别Cas12a会受到基因灵活性的影响。

因此，除了线性序列之外，在Cas12a基于基因组工程的应用。