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行业动态

功能性脱氧核糖核酸调节CRISPR-Cas12a用于非核酸目标现场诊断的传感器

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-03-24 17:46
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功能性脱氧核糖核酸调节CRISPR-Cas12a用于非核酸目标现场诊断的传感器
cas12a

 

CRISPR-Cas系统除了其非凡的基因组编辑能力之外,还凭借其高碱基分辨率和等温信号放大,开启了生物传感应用的新时代。然而,报道的CRISPR-Cas传感器主要仅用于检测核酸,对非核酸靶标的应用有限。为了充分发挥CRISPR-Cas传感器的潜力,拓宽其在非核酸靶标检测和定量中的应用,我们在此重新报道CRISPR-Cas12a由功能性脱氧核糖核酸分子(如适体和脱氧核酶)调节的传感器,对小有机分子和金属离子检测具有选择性。

该传感器基于Cas12a从属报告系统包括Cas12aCRISPR核糖核酸(crRNA)和它的单链脱氧核糖核酸底物标记荧光团和淬灭剂在每端(ssDNA-FQ),和脱氧核糖核酸分子,可以锁定脱氧核糖核酸激活Cas12a-crRNA,阻止ssD-NA的切割功能Cas12a在没有fDNA目标的情况下。脱氧核糖核酸靶的存在可以触发脱氧核糖核酸激活剂的释放,然后通过以下方式激活ssDNA-FQ的裂解Cas12a导致可由市售便携式荧光计检测到的荧光信号增加。

使用这种方法,在环境温度(25 )下,使用简单快速的检测工作流程(两步和%3C15分钟)定量检测三磷酸腺苷和钠离子,使fDNA调节的CRISPR系统适用于现场测试或护理点诊断。由于可以获得fDNAs来识别多种目标,这里展示的方法可以将这种强大的CRISPR-Cas传感器系统显著扩展到许多其他目标,从而提供一个新的工具箱来将CRISPR-Cas系统显著扩展到生物分析和生物医学应用的许多领域。

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