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这些特性使得cas9在核酸检测方面特别独特

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-03-11 10:12
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这些特性使得cas9在核酸检测方面特别独特
cas9

 

一、在最近的一篇论文中,DoudnaBanfield和他的同事利用这一逻辑确定了一种更简单、更小的Cas蛋白,它代表了Cas进化过程的一个快照,令人惊讶的是,它提供了相对于目前为止所表征的Cas蛋白的几个生物技术优势。

二、简而言之,通过筛选terabase规模的测序数据集,寻找具有RuvC样结构域和CRISPR位点附近的基因,研究人员鉴定了一组高度新颖的、假定的单效应Cas蛋白。这些变异体被称为cas9s,让人想起其他五型Cas蛋白,包括特征良好的Cas12a蛋白质和最近发现的CasX变体,但以其极小的尺寸而著名,大约为400-700个氨基酸,而不是2类变体的典型≥1000个氨基酸(数字1)

这个结果提出了一个问题:如果没有聚丙烯酰胺结合要求,cas9的真正底物是什么?在这里,研究人员也发现了一个令人惊讶的结果,当活性分析显示cas9只切割单链的脱氧核糖核酸(ssDNA),而不切割双链的脱氧核糖核酸或单链的核糖核酸。Cas蛋白通常能耐受靶结合的错配,但PAM结合是绝对必要的;因此,这个结果提出了另一个机械论的问题。cas9对位置不匹配是否敏感?研究人员将两个核苷酸错配铺在不同的ssDNA底物上,发现没错,cas9是敏感的,而且方式独特。与其他Cas蛋白不同,并且由于未知的原因,cas9在其靶区中间大约6 bp的区域非常容易错配。

 

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