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DNA探针的标记基本原理

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-03-09 11:22
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DNA探针的标记基本原理
DNA探针

 

DNA探针的基本原理】

核酸(脱氧核糖核酸或核糖核酸)分子探针是指已知序列的核酸片段,它们可以退火并与互补的核酸序列杂交,并且可以通过特殊方法检测。根据核酸探针标记物的性质及探针的检测方法不同,核酸探针可分为:放射性标记探针和非放射性标记探针。

DNA 探针标记的方法主要有:缺口平移法、随机引物法、末端标记法和化学标记法等。本实验采用DIG DNA Labeling andDetection Kid(地高辛标记检测试剂盒),通过随机引物法标记非放射性DNA探针。标记原理如下:使用随机六聚体作为引物(含有具有各种可能序列的六核苷酸混合物),模板脱氧核糖核酸变性退火并与引物杂交。

在大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶克莱诺片段的催化下,以单链脱氧核糖核酸为模板,地高辛标记的脱氧核糖核酸(DIG-11-dUTP)等四种脱氧核糖核酸为原料,以随机六聚体为引物合成与模板互补的脱氧核糖核酸片段。由于DIG-11-dUTP可以在聚合反应中结合到新合成的脱氧核糖核酸链中,新生成的脱氧核糖核酸互补链具有地高辛标记。当加入抗地高辛碱性磷酸酶酶联抗体时,探针和抗体形成抗体半抗原复合物,在底物(NBTBCIP)存在下,通过碱性磷酸酶的作用在杂交位点形成蓝带或色斑。

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