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行业动态

如何测试sgRNA的效率

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-03-03 11:35
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如何测试sgRNA的效率
sgrna

 

为了顺利编辑感兴趣的基因组,测试设计的sgRNA很重要。幸运的是,已经开发了一些程序,包括斑马鱼的CRISPRscanSSCCRISPR序列扫描和WU-CRISPR,可以用来预测sgRNA的效率和适用性。然而,这些计算工具的预测效率并不充分。你的sgRNA通常可能起作用,但有时却不起作用。因此,有必要对sgRNACas9的切断效率进行可靠的系统测试。

在喜欢的系统中使用sgRNA之前,有几种简单的方法。这些方法基于体内或体外方法。

体外sgRNA测试

sgRNA的体外检测方法是一种流行的、易于建立和使用的方法。首先,使用T7体外转录和凝胶纯化技术合成sgRNA。你可以从两个退火的单链寡核苷酸或一个质粒克隆作为你的模板。在sgRNA的合成上有一些方法和协议可以在线获得。

接下来,添加你sgRNA DNA模板(通常是你的基因感兴趣的区域)PCR产物,Cas9信使rna和蛋白质和孵化37°C的混合。确保你运行你的控制!

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