Wei Li等人对cas12a的研究

 

一、扩展Cas12a的全部功能

Wei Li等人发现， V-A型Cas12a系统是十分保守的，尤其在成熟的crRNA序列和二级结构中。基于这种保守性，研究人员推断他们必需的PAM序列也是保守的。本文的体外研究数据显示，这些新鉴定的cas12a核酸酶可以利用5T-PAM富集区，作者随后发现了更多用cas12a核酸酶编辑哺乳动物基因组的潜在位点。

二、利用非常规的PAMs增加基因组的覆盖率

与广泛使用的AsCas12a和LbCas12a相比，这六种Cas12a的同源物中的一些可以识别更简单的5-TTN PAM，使得基因组的覆盖率提高到四倍水平。此外，在体外切割试验中，他们发现HkCas12a可以利用非常规聚丙烯酰胺(5-YYN和5-TBBN-)。 尽管在细胞系中很少有PAM序列被鉴定出来，但研究者可以利用HkCas12a对5’-YTN 和 5’-TYYN PAMs 的识别来实现对哺乳动物的基因编辑。在哺乳动物基因组中，与经典的5-ttnpam相比，cas12a对PAM的识别可以使cas12a的目标范围增加两倍。