测定Cas12a / crRNA /靶DNA复合物的ssDNA切割活性

 

　　文章研究表明ssDNA的切割活性，包括顺式和反式切割，在Cas12a蛋白中都是普遍存在的。值得注意的是，Cas12a是迄今为止第一个具有特征性的Cas蛋白，其三元配合物具有反式ssDNA切割活性。考虑到环境中存在大量的单链病毒，Cas12a可能在进化过程中发挥ssDNA裂解活性，并可能成为防止外源SSDna入侵的有力工具。

除了Cas12a之外，还发现来自2 VI型CRISPR系统的一种由核糖核酸引导和核糖核酸靶向的CRISPR效应子Cas13a(以前称为c2c2)对核糖核酸具有反式切割活性。最近，Cas13a的这一特性已成功用于快速且灵敏的核酸检测。因此，研究中表征的Cas12a的切割活性也可以以类似的方式用于潜在的生物技术应用。由于不同的Cas12a配合物在dsDNA上表现出不同的反式裂解活性，因此需要对其机理进行深入的研究。