接下来,添加你sgRNA DNA模板(通常是你的基因感兴趣的区域)的PCR产物,Cas9信使rna和蛋白质和孵化37°C的混合。确保你运行你的控制!
对于阴性对照，我包括一个管不包含Cas9。与此同时，我用经过验证的sgRNA进行反应，以得到阳性对照。培养1 - 2小时37°C,然后运行样本2%的凝胶。如果你看到两个或更多，恭喜你!你成功的分裂了你的DNA模板。
这个测试非常容易执行，并且很容易在几个小时内弄清事情是否正常运行。甚至还有一些商业工具包来简化这项任务。不过要小心，这个系统并不完美。一些有效的sgRNAs在体内不能很好地工作。这通常是由于细胞环境阻止Cas9/sgRNA复合物的形成和/或抑制卵裂。