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行业动态

AcrVA4可以在切割cas12a复合物

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-01-07 11:31
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AcrVA4可以在切割cas12a复合物
cas12a  -
  过体外结合实验,研究人员发现AcrVA4可以在切割前后两种状态下结合lbCas12a-crRNA二元复合物和lbcas12a-crRNA-dsDNA三元复合物,但不能结合纯cas12a蛋白,表明AcrVA4识别cas12a的特异性构象。随后,他们利用冷冻电子显微镜的单粒子三维重建技术,分析了AcrVA4结合lbcas12a-crRNA的原子分辨率的三维结构。该结构表明AcrVA4以同二聚体的形式存在,并与一个或两个lbcas12a-crRNA二元复合物结合。
  在两种形式的复合物中,AcrVA4通过类似的机制与Cas12a相互作用,表明两种结合模式具有相同的抑制作用。进一步的结构分析表明,AcrVA4利用其C末端结构域与LbCas12a的多个结构域相互作用,并锁定其构象,从而阻止靶核酸和crRNA间隔序列之间的互补配对,进一步阻断核酸切割反应。有趣的是,当AcrVA4在裂解前状态下与lbCas12a-crRNA-dsDNA三元复合物(R环状态)相互作用时,结合的dsDNA可以被剥离,从而拯救捕获的靶脱氧核糖核酸免于裂解。此外,AcrVA4还能以高亲和力结合裂解的lbca12a-crRNA-dsdna复合物,这可能干扰新CrRNa对Cas12a的替换,并阻断酶的再循环过程
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