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T7rna的各项数据

  • 作者:admin
  • 发布时间:2019-12-19 12:58
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T7 RNA的各项数据
一、来源:由大肠杆菌表达,表达基因为嗜菌体T7 RNA Polymerase基因。
    活性定义: 37℃60分钟内,催化1 nmol AMP掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
二、活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),6mM MgCl2,10mM DTT,2mM spermidine,0.5mM NTP,0.6MBq/ml[3H]-ATP,20μg/ml plasmid DNA containing the specific T7 RNA Polymerase promoter sequence。
三、纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
四、酶储存溶液:50mM Tris-HCl(pH8.0),150mM NaCl,5mM DTT,0.1mg/ml BSA,0.5mM Elugent,50% glycerol。
五、Transcription Buffer(5X):200mM Tris-HCl(pH7.9 at 25℃),30mM MgCl2,50mM DTT,50mM NaCl,10mM spermidine。
六、失活或抑制:70℃加热10分钟可使T7 RNA Polymerase失活。加入适量EDTA也可以使T7 RNA Polymerase失活。螯合剂、浓度大于150mM的钠、钾或铵盐可以显著抑制T7 RNA Polymerase的活性。
七、T7的consensus promotersequence如下:
    -15  -10   -5   +1  +5
    TAATACGACTCACTATAGGGAGA
t7rna
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