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行业动态

与Cas9核酸酶同源定向修复(HDR)

  • 作者:admin
  • 发布时间:2019-12-19 12:47
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Cas9核酸酶同源定向修复(HDR)

gRNA的最后20个碱基对充当归巢装置,将Cas9内切核酸酶募集到合适的靶序列。一旦到达,Cas9的两个切割结构域在PAM序列的上游产生3或4个碱基对的双链断裂。然后通过易错的非同源末端连接修复途径或模板依赖性同源定向修复来修复DSB。
除了NHEJ,细胞还能够利用称为同源定向修复(HDR)途径的更精确的修复机制。可以利用这种修复机制将特定的核苷酸修饰引入基因组DNA。在该方法中,将与预期编辑位点紧邻上游和下游的序列具有高度同源性的DNA修复模板与适当的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中。在存在这种合适的模板的情况下,错误较少的HDR机制可以通过重组忠实地对Cas9诱导的DSB位点进行所需的改变。在设计修复模板时,确保目标序列不会立即跟随PAM序列,或者PAM序列被排除或变异。这是为了避免同一CRISPR Cas9系统对修复模板的降解。
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