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CRISPRCas9基因编辑是如何工作的?

  • 作者:admin
  • 发布时间:2019-12-12 17:51
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CRISPR/Cas9基因编辑是如何工作的?
当gRNA和Cas9在一个细胞中一起表达时,gRNA:Cas9复合体被招募到靶基因序列中,该序列位于被称为PAM的原始间隔基序的上游。大多数商业化的Cas9酶将PAM基序定位为NGG(任何核苷酸后面都有两个鸟嘌呤)。
gRNA与靶基因的结合是通过基因组靶序列和gRNA 20个核苷酸间隔之间的互补碱基配对来实现的。然后切割基因组脱氧核糖核酸,在聚丙烯酰胺序列后诱导双链断裂。关键是Cas9不能消化脱氧核糖核酸,除非它与gRNA结合,从而为系统提供特异性。
编辑过程是通过使用内源性非同源末端连接(NHEJ)途径修复骨折完成的。尽管这种脱氧核糖核酸修复系统是最有效的修复方法,但它容易出错,有时允许小的插入或缺失,这可能会导致框架移位并减少蛋白质产量。如上所述,另一种选择是通过提供人力资源模板来利用内源性同源定向修复(HDR)系统。这在引入目标突变时使用。
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