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钩端螺旋体基因工程的新工具

  • 作者:admin
  • 发布时间:2020-06-16 11:56
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钩端螺旋体病是一种由钩端螺旋体属的致病菌引起的全球人畜共患
钩端螺旋体还包括自由活动的腐生菌菌株。钩端螺旋体基本生物学和毒力机制的许多方面仍未探索,主要是由于缺乏可用于这些细菌的有效遗传工具。最近,化脓性链球菌的 II型CRISPR / Cas系统已被广泛用作细菌中的有效基因组工程工具,其方法是在所需的基因组靶标中诱导双链断裂(DSB),该双链断裂是由RNA引导的DNA内切核酸酶Cas9引起的,并且DSB维修相关机械。在目前的工作中,双歧利什曼原虫中表达异源化脓性链球菌 Cas9的质粒细胞产生,并且该酶可以表达而对钩端螺旋体细胞没有明显毒性。但是,双弯曲乳杆菌细胞不能修复RNA引导的Cas9诱导的DSB。因此,我们使用一种称为CRISPR干扰(CRISPRi)的策略使用催化死亡的Cas9(dCas9)获得基因沉默而不是破坏基因。当同时表达靶向β-半乳糖苷酶基因编码链的dCas9和单向导RNA(sgRNA)时,我们证明了双弯曲乳杆菌细胞中的完整基因沉默此外,当该系统用于沉默dnaK基因时,没有发现菌落,表明DnaK蛋白在钩端螺旋体中必不可少此外,鞭毛马达开关FliG基因沉默导致细菌运动性降低。据我们所知,这是将CRISPRi系统普遍应用于钩端螺旋体和螺旋体的第一项工作,扩展了可用于了解钩端螺旋体生物学的工具。
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