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钩端螺旋体基因工程的新工具
- 作者：admin
- 发布时间：2020-06-16 11:56
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钩端螺旋体病是一种由钩端螺旋体属的致病菌引起的全球人畜共患病，钩端螺旋体还包括自由活动的腐生菌菌株。钩端螺旋体基本生物学和毒力机制的许多方面仍未探索，主要是由于缺乏可用于这些细菌的有效遗传工具。最近，化脓性链球菌的 II型CRISPR / Cas系统已被广泛用作细菌中的有效基因组工程工具，其方法是在所需的基因组靶标中诱导双链断裂（DSB），该双链断裂是由RNA引导的DNA内切核酸酶Cas9引起的，并且DSB维修相关机械。在目前的工作中，在双歧利什曼原虫中表达异源化脓性链球菌 Cas9的质粒细胞产生，并且该酶可以表达而对钩端螺旋体细胞没有明显毒性。但是，双弯曲乳杆菌细胞不能修复RNA引导的Cas9诱导的DSB。因此，我们使用一种称为CRISPR干扰（CRISPRi）的策略使用催化死亡的Cas9（dCas9）获得基因沉默而不是破坏基因。当同时表达靶向β-半乳糖苷酶基因编码链的dCas9和单向导RNA（sgRNA）时，我们证明了双弯曲乳杆菌细胞中的完整基因沉默。此外，当该系统用于沉默dnaK基因时，没有发现菌落，表明DnaK蛋白在钩端螺旋体中必不可少。此外，鞭毛马达开关FliG基因沉默导致细菌运动性降低。据我们所知，这是将CRISPRi系统普遍应用于钩端螺旋体和螺旋体的第一项工作，扩展了可用于了解钩端螺旋体生物学的工具。
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