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行业动态

可逆阀微流控芯片与相结合CRISPR Cas12视觉检测副溶血性弧菌

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    首先是摘要。作者首先介绍了副溶血性弧菌是一种对海鲜有害的细菌。作者使用微流控芯片和Cas结合12种方便快捷的方法,整个检测过程只需50分钟。微流控芯片通过可逆阀和科里奥利伪力精确控制液体流动。Cas12识别LAMP扩展产品发出绿色荧光信号后,阴性扩展产品不发出荧光信号,可用肉眼区分阳性和阴性。600μL在样本中,检测仅限于30复制每反应。

    后作者提取核酸、LAMP扩增、CRISPRCas12系统进行了一系列优化。首先是核酸提取的优化,作者开始添加300微升0.5M异硫氢胍酸作为裂解液,经过65摄氏度10分钟后,将混合物加入样本腔,然后通过酒精和无RNA酶水清洗洗脱,LAMP反应。反应后,发现从微流控芯片中提取的核酸LAMP反应的T值为15分钟,而商业试剂盒提取核酸进行LAMP反应T值为8分钟。作者猜测微流控芯片的核酸捕获效率不足。文献报道称,高浓度盐有利于硅胶膜捕获核酸,因此作者正在裂解Buffer最终浓度为4M的NaCl,LAMP反应T值提高到9分钟。最后,作者将梯度稀释样本添加到微流控芯片中进行实验,得出检测限制为1.2×102复制每个反应。同时,做了一组RT-PCR实时荧光定量P作为对照CR检测限也为1.2×102复制每个反应。说明微流控芯片能有效提取纯化核酸。

  • Cas12识别

    然后,为了实现可视化检测,作者引入了CRISPR系统。作者首先在芯片外进行实验,微升到25LAMP在扩展产品中加入20微升Cas在12个系统中,可以看到荧光信号在10分钟内到达平台期。为了方便CRISPR在完成L之前,系统结合进芯片AMP扩增后,50微升CRISPR系统从洗脱腔加入,逆时针离心30秒,CRISPRCaS12a体系进入EP管并与LAMP通过荧光定量P扩展产品混合CR荧光信号在15分钟内到达平台期。作者设计了一个小装置,包括一个L,以实现裸眼可视化ED、一个460nm一个520的滤光片nm荧光信号可在5分钟内通过该装置观察到滤光片和外壳,检测限也可达到30份每反应。


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