欢迎来到广州博徕斯生物科技股份有限公司

博徕斯生物,高技术,高质量,高性价比

国内最全的基因编辑(cas系列)蛋白种类提供商

咨询热线:

189-2400-9712

{dede:global.cfg_gongsi/}

主页 > 新闻资讯 > 行业动态

联系我们

手机:189-2400-9712

邮箱:service@bio-lifesci.com

地址:广州高新技术产业开发区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器A802房

行业动态

用以组成基因遗传筛选的性能卓越CRISPR-Cas12a基因组编写

  • 发布时间:
  • 点击:
  
用以组成基因遗传筛选的性能卓越CRISPR-Cas12a基因组编写(图1)
 
  提升AsCas12a系统以提升 哺乳类动物细胞的敲除高效率
  用以哺乳类动物细胞中慢病毒AsCas12a和CRISPR RNA(crRNA)转导试验的提升媒介的配备。应用嘌呤霉素(Puro)抵抗性基因挑选AsCas12a呈阳性细胞,并在细胞市场竞争实验里将GFP汇报基因与crRNA表述联络起來,以跟踪crRNA阳性物种。b评定AsCas12a敲除高效率的细胞市场竞争测量的实验工作内容。用所显示的AsCas12a媒介平稳转导K562细胞,随后用crRNA病毒继发感染。在一段时间内,根据流式的细胞仪的crRNA阳性细胞群跟踪用以测算每一个所显示crRNA的呈阴性挑选燃气表。蜂窝状市场竞争测量以较为NLS编码序列(可变性总数的AsCas12a系统的敲除高效率Ç),具备或不具备额外的立即反复的crRNA的(DR)3'(d),并且用AsCas12a组合(E174R和S542R)(e)。在塑造期内的特定时间点绘图crRNA阳性细胞(规范化至第三天精确测量)。设计方案了2个对于PCNA的crRNA,PCNA是DNA复制的必不可少基因。“ e”意味着外显子。(n  = 3)。标示p值(两尾韦尔奇不了对t检验)。误差线小于符号总宽,未显示信息。显示信息的全部误差线均表明均值±SD。源数据信息做为源 数据库文件出示。
用以组成基因遗传筛选的性能卓越CRISPR-Cas12a基因组编写(图2)
  opAsCas12a在单基因敲除筛选中成绩突出
  为了更好地将大家的opAsCpf1系统相对性于SpCas9的特性做为标准,大家开展了单基因筛选,以评定已经知道的抗癌药物靶点。我们在鼠Mll-Af9 / Nras G12D亚急性髓细胞性败血症细胞系(RN2)中开展了根据opAsCpf1和SpCas9的筛选,该细胞系之前已用以评定SpCas9 18的表观遗传依赖感。最先,大家建立了一个表述opAsCpf1的RN2细胞系(RN2c12)。随后,大家认证应用crRNAs靶向必不可少基因大家opAsCpf1系统的效率高淘汰赛制RPA3和已经知道的败血症依靠BRD419。之前,大家发觉靶向sgRNA的传统蛋白质结构域地区比靶向初期外显子编码序列的sgRNA造成高些占比的作用敲除等待基因,进而提升 了根据Cas9的基因遗传筛选的稳健性18。为了更好地明确蛋白质编号基因中AsCpf1的靶位怎样危害作用敲除的造成,大家设计方案了一个crRNA文库,该文库超越一组已经知道的败血症依赖感和泛必不可少基因的编码区和非编码区。这种筛选結果确认,与靶向非结构域外显子地区的crRNA对比,靶向传统的蛋白质结构域的crRNA主要表现出更强的缺少燃气表。靶向非编码区的crRNA对细胞繁衍的危害最少。
  根据域靶向标准,大家搭建了对于155个涉及到表观遗传管控的蛋白域的订制opAsCpf1 crRNA百度文库。接下去,大家应用此表观遗传学的opAsCpf1 crRNA百度文库在RN2c12细胞中开展了筛选。总体来说,这种数据信息突显了对蛋白编号基因作用开展以域为关键的剖析的优点,并适用大家的结果:大家的opAsCpf1系统在单基因缺少筛选中的特性与SpCas9类似。
在线客服
联系方式

热线电话

189-2400-9712

上班时间

周一到周五

公司电话

线